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    DTT是什么試劑?

    dtt是什么試劑 DTT是什么試劑?

     

    dtt溶解和保存條件?

    DTT是什么試劑?

    用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,過濾去菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

    【注意】DTT或含有DTT不能對溶液進行高壓處理。

    保存條件:

    -20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。

    DTT其中一個用途是作為一基化DNA還原劑和去保護劑。DNA末端硫原子傾向于在溶液中形成二聚體,尤其是在有氧的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯反應實驗(如DNA生物傳感器中的固定)效率DNA溶液中加入DTT,反應一段時間后,可以減少DNA的二聚化。

    dtt溶解和保存條件?

    DTT( 二硫蘇糖醇)是實驗室常用的還原試劑,常用于蛋白質保存和蛋白質二硫鍵還原。DTT進入的特點是容易氧化,穩定性差,一般DTT常保存在-20度可長達數年。

    DTT它是一種非常強的還原劑,其還原性在很大程度上是由于其氧化狀態六元環(包括二硫鍵)的結構穩定性。它的氧化還原電勢在于pH為7時為-0.33伏。

    DTT特點與DDT的保存

    DTT是一種常用的還原劑,具有抗氧化作用,進口分裝。DTT與巰基乙醇相比,效果相似,但是DTT刺激性氣味要小得多,毒性要比巰基乙醇低得多。DTT在濃度比較低7倍于巰基乙醇的情況下,兩者的效果相似。DTT價格略高。DTT一般保存條件:-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。

    因為容易被空氣氧化,DTT穩定性差,但在惰性氣體中冷凍或處理可以延長其使用壽命。由于質子化的硫親核性較低,pH值的降低,DTT有效還原也隨之降低Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP鹽酸鹽)可以作為低pH值條件下DTT替代品,替代品DTT更為穩定。

    應用:

    DTT其中一個用途是作為一基化DNA還原劑和去保護劑。DNA末端硫原子傾向于在溶液中形成二聚體,尤其是在有氧的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯反應實驗(如DNA生物傳感器中的固定)效率DNA溶液中加入DTT,反應一段時間后,可以減少DNA的二聚化。

    DTT它也常用于還原蛋白質中的二硫鍵,可以用來防止蛋白質中的半胱氨酸之間形成的蛋白質分子 分子間內或二硫鍵。但DTT蛋白質結構中包埋的二硫鍵(溶劑無法觸及)通常無法恢復。這種二硫鍵的恢復通常需要首先改變蛋白質(高溫加熱或添加變性劑,如6M 鹽酸胍、8M 尿素或1\\% SDS)。反之,根據DTT在存在的情況下,二硫鍵的還原速度不同,可以判斷其包埋程度的深度。

    DTT在蛋白純化 以及在保存中的作用

    我們知道Cys存在于許多蛋白中-SH它通常作為一個活躍的中心起作用,或者,兩個-SH二硫鍵連接,是維持蛋白質先進結構的重要橋梁。-SH具有很強的還原性,溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化,使蛋白質失去活性。因此,在蛋白純化中 保存時,在溶液中加入一定量DTT,以免蛋白-SH被氧化而失活。但是這里有一個矛盾,DTT加多少量,使-SH保持還原狀態,使二硫鍵不還原?除上述功能外,DTT還有哪些方面可以發揮作用?

    我也聽過一位專家說,以摩爾數為基礎,保護5-10倍的數量-SH。如果報告了蛋白質buffer中含有15\\大約%的甘油對蛋白質有很好的穩定作用。補充一點:如果:dtt蛋白摩爾的比例增加到1:100,DTT二硫鍵可以被破壞,此時相應的濃度一般為10mM左右,這通常用于還原肽圖。

    但是有些分子 由于空間位阻的作用,內部二硫鍵的還原劑量增加到很大程度,無法破壞。此時,可能需要與尿素等變性劑結合,以完全中斷二硫鍵(如內含體變性)

    DTT只有在離子狀態下才有效pH7-9.5時效果強,pH降到3以下幾乎沒有電離,所以可以通過減少來減少pH下來到3DTT現在才知道DTT作用還受到pH的影響。說到尿素變性,如果蛋白質中存在分子 即使有高濃度的尿素或鹽酸胍,濃度的尿素或鹽酸胍,也沒有高濃度的二硫鍵DTT還原劑不能完全改變蛋白質(打破二硫鍵)

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